2005 年 10 月 第 15 卷 第 5 期 中国比较医学杂志 CHINESE JOURNAL OF COMPARATIVE MEDICINE October , 2005 Vol. 15 No. 5 研究报告 二月桂酸二丁基锡(DBTD) 对雄性大鼠睾丸 组织中酶活性的影响 宋祥福 , 李铁骥 ,于光艳 (吉林大学公共卫生学院 ,长春 130021) 【摘要】 目的 探讨二月桂酸二丁基锡(DBTD) 对雄性大鼠生殖系统的影响。方法 将健康成年 Wistar 雄性 大鼠 28 只 ,体重(260 ±10) g ,随机分为 4 组 ,即 0、5、10、20 mgΠkg 剂量组 ,每组 7 只。灌胃染毒 5 周 ,末次染毒后 48 h 处死动物。结果 与对照组相比 ,各剂量组大鼠睾丸中锡含量差异无显著性 ( P > 0105) ,而乳酸脱氢酶 (LDH) ,氧 化氮(NO) 各剂量组 ,一氧化氮合酶(NOS) 及酸性磷酸酶(ACP) 中高剂量组与对照组差异都有显著性。结论 DBTD 具有睾丸毒性 ,能干扰雄性大鼠睾丸组织中酶的活性。 【关键词】 二月桂酸二丁基锡 ;酸性磷酸酶 ; 乳酸脱氢酶 ; 一氧化氮 ; 一氧化氮合酶 【中图分类号】Q956 【文献标识码】A 【文章编号】167127856 (2005) 0520285203 Effect of Dibutyltin Dilaurate on Activity of Enzyme in Testis Tissue of Male Rats SONG Xiang2fu , LI Tie2ji , YU Guang2yan (School of Public Health ,Jilin University ,Changchun 130021 , China) 【Abstract】 Objective To study the effect of dibutyltin dilaurate (DBTD) on reproductive system of male rats. Methods 28 healthy male rats were divided into 4 groups ,7 each. The rats were administrated orally with DBTD at the dose of 0 ,5 ,10 and 20 mgΠkg , respectively , and killed after 5 weeks for measurement of ACP , LDH , NO , NOS and tin content in testis tissue. Results There was no difference in different dose groups of tin content in testis tissue compared with the control group , but the activity of LDH , NO in dose groups was different from control group. At the same time , the content of NOS in 10 ,20 mgΠkg groups and the activity of ACP in 20 mgΠkg group were also different from the control group. Conclusion The study shows that DBTD has testis toxicity , and it can disturb the activity of enzyme in testis tissue. 【Key words】 Acid phosphatase ; Lactate dehydrogenase ; Nitric oxide ; Nitric2oxide synthase ; Dibutyltin dilaurate [作者简介]宋祥福(1964 - ) ,男 ,主管技师 ,研究方向 :苯、醛及 工业污染物的生物效应研究。 [通讯作者]李铁骥 ,男 ,副教授 ,研究方向 :苯、醛及工业污染物 的生物效应研究。 二月桂酸二丁基锡 (DBTD) 是一种化学性质活 泼 ,中等毒性的有机锡化合物 ,它用途十分广泛 ,主 要用于 PVC 软质透明制品的加工和聚氨酯光泡沫 塑料合成以及氯乙烯共聚过程 ,有机锡引起海洋生 物生殖系统改变已有报道 [1 ,2 ] ,因此探讨 DBTD 对雄 性大鼠生殖系统的影响具有重要的现实意义。 1 材料和方法 111 实验动物 由吉林大学实验动物中心提供的 普通 级 健 康 成 年 雄 性 Wistar 大 鼠 (合 格 证 号 : 0016445) 28 只 ,体重(260 ±10) g ,观察 1 周后随机分 为 4 组 ,即 0、5、10、20 mgΠkg 剂量组 ,每组各 7 只动 物。 112 受试物 DBTD 为天津福晨化学试剂厂产品 , 化学纯 ,使用时以色拉油溶解。 113 染毒方式和剂量 按染毒剂量用色拉油配制 成不同浓度的 DBTD 溶液灌胃 ,灌胃量为 1 mlΠ200 g 体重 ,对照组给予等量的色拉油 ,每周染毒 5 d ,连续 染毒 5 周 ,末次染毒 48 h 后处死动物 ,剪开阴囊 ,取 出睾丸、附睾 ,备用。 114 指标和方法 准确称取部分睾丸 ,加 9 倍的生 理盐水用超声组织匀浆器在冰水浴中制成 1∶10 组 织匀浆 , 离心后取上清液备用。测酸性磷酸酶 (ACP) 、乳酸脱氢酶 (LDH) 、一氧化氮 (NO) 、一氧化 氮合酶(NOS) 的含量。试剂盒由南京建成生物工程 研究所提供 (批号 20040324) ,按试剂盒相应指标检 测说明书操作及计算。 2 结果 各组数据经 SPSS1010 进行单因素方差分析。 2. 1 各组睾丸、附睾重量 ,睾丸中锡含量 ,见表 1。 表 1 DBTD 染毒后各剂量组 Wistar 大鼠睾丸和附睾的重量 ,睾丸锡含量( €x ±s , n = 7) Tab. 1 Weight of testis and epididymis , tin content in testis tissue ( €x ±s , n = 7) 组别(mgΠkg) Groups 睾丸重量(g) Testis weight (T) 附睾重量(g) Epididymis weight (E) 睾丸锡含量( ×10 - 2μgΠkg) Tin content (T) 对照组 Control 3101 ±0116 0199 ±0116 01090788 ±2163 5 2192 ±0143 0197 ±0118 01105533 ±2137 10 2178 ±0115 0196 ±0109 01130678 ±2137 20 2151 ±0165 0191 ±0119 01138470 ±4136 不同剂量组与对照组比较 P > 0105 ,different dose groups compared with the control group. 由表 1 可见 ,随着染毒剂量的增加 ,各剂量组睾 丸及附睾重量有下降趋势 ,睾丸中锡含量有升高趋 势 ,但与对照组相比差异无显著性。 212 睾丸中各项生化指标测定 ,见表 2。 表 2 睾丸中各项生化指标 Tab. 2 Different biological index in testis tissue ( €x ±s , n = 7) 组别(mgΠkg) Groups 酸性磷酸酶 ACP (UΠg) 乳酸脱氢酶 LDH (UΠg) 一氧化氮 NO (μmolΠg) 一氧化氮合酶 NOS (UΠmg) 对照组 Control 528. 2 ±11718 29965 ±2399 0135 ±0115 6168 ±0195 5 422179 ±10316 24585 ±5029 3 1173 ±0156 33 7133 ±0139 10 348134 ±50191 3 20180 ±4855 33 1186 ±0141 33 7165 ±0187 3 20 338186 ±19129 3 13502 ±2884 33 2143 ±0183 33 8144 ±1108 33 不同剂量组与对照组比较 3 P < 0105 ,33 P < 0101 , compared with the control group. 由表 2 可见 ,各剂量组睾丸组织中 LDH 活性、 NO 含量与对照组比较差异均有显著性 ;10、20 mgΠkg 组睾丸组织中 ACP、NOS 活性与对照组比较差异均 有显著性。 3 讨论 各组睾丸、附睾的重量比较显示 ,随染毒剂量增 高 ,大鼠睾丸、附睾的重量有下降趋势 ,但差异无显 著性。而睾丸中锡含量虽有增高 ,但差异也不显著 , 这说明 ,有机锡具有睾丸毒性 ,但锡在睾丸中蓄积量 不明显 ,睾丸萎缩可能与该化合物抑制实验动物的 生殖功能、酶活性以及破坏生殖系统结构有关。 NO 是一种具有双重作用的体内局部调节因子 , 低浓度 NO 具有保护精子活力的作用 ,而高浓度的 NO 则损害生精功能 ,抑制精子活动度 ,抑制精子的 高反应性能力及降低顶体反应率 ,使男性生育能力 下降 ,严重时可导致男性不育 [3 ,4 ] 。NOS 是 NO 生成 的关键酶。本次实验显示 ,实验组的 NO 和 NOS 显 著高于对照组 ,可见 DBTD 可通过改变 NO 和 NOS 来影响雄性大鼠的生殖功能。有学者研究表明 , ACP 主要分布于睾丸支持细胞的细胞质内。ACP 活 性可能与其吞噬功能有关 ,可作为衡量是否有生精 障碍的指标。睾丸 LDH 主要位于生精小管内 ,参与 能量代谢和生精上皮的成熟。该酶受抑制 ,将阻碍 能量的供给 , 逐渐导致细胞变性。本研究发现 DBTD 可使雄性大鼠的 ACP 和 LDH 的活性明显降 286 中国比较医学杂志 2005 年 10 月第 15 卷第 5 期 Chin J Comp Med , October 2005 ,Vol. 15. No. 5 低 ,从而引起生精障碍 ,阻碍能量代谢 ,影响生精上 皮成熟。 本次实验通过 DBTD 对雄性大鼠睾丸组织中酶 活性影响的研究 ,初步了解了 DBTD 对雄性大鼠生 殖系统的毒作用 ,至于 DBTD 对雄性大鼠生殖的毒 作用机理有待进一步研究。 参考文献 : [ 1 ] Divis I , Spooner H. The influence of organotin compounds on marine organisms[J ]. Mar Poll Boll , 1982 , 21 (8) :33 - 36. [ 2 ] 李海山 ,段志文 ,张玉敏 ,等. 呋喃丹对雄性大鼠生殖内分泌 系统的影响[J ]. 沈阳医学院学报 ,2003 ,5 (3) :7 - 18. [ 3 ] 郑航. 一氧化氮(NO) 对男性生育能力的影响[J ]. 国外医学泌 尿系统分册 ,1999 ,3 (19) :127 - 129. [ 4 ] 王一飞. 人类睾丸及附睾的组织化学观察[J ] ,细胞生物学杂 志 ,1983 ,5 (4) :7. 〔收稿日期〕2004205231 论著摘要 实验用猕猴 CD3、CD4、CD8、CD20 细胞阳性率的测定 王志鹏 1 , 李 晨 1 , 曹云新 2 ,梅其炳 1 ,吕正光 1 (1. 第四军医大学药学系药理学教研室 ,西安 710032 ; 2. 第四军医大学基础部免疫学教研室 ,西安 710032) CD3、CD4、CD8、CD20 是重要的白细胞分化抗原 ,对于 T 细胞、B 细胞的识别、黏附、分化具有重要作用。CD3 + 、 CD4 + 、CD8 + 、CD20 + 细胞阳性率是基础免疫学和临床免疫学 研究的重要指标。 猕猴(macaca mulatta) 与人类有较近的亲缘关系 ,在许多 生物学特性方面与人类较为接近 ,是研究人类疾病机理的理 想实验动物。其生理生化指标对于试验研究具有重要的参 考意义 ,国内外的报道已经很多 ,且已证明 ,这些指标受品 系、年龄、性别及饲养环境影响而有所不同 ,但目前尚缺少关 于猕猴免疫学指标的报道。本实验室对猕猴 CD3、CD4、CD8、 CD20 细胞阳性率进行测定 ,并对不同性别动物的参数进行 对比。为选择理想的实验动物、建立人类疾病的动物模型提 供参考数据。 1 材料和方法 1. 1 动物 饲养于特制猴笼中 ,每笼 1 只 ,饲养室温度 22～26 (C , 湿度 50 %～70 % ,光照 12 h ,自由活动。人工饲料喂养 ,每日 辅加水果、蔬菜、玉米等 50～100 g ,自由饮用自来水。试验前 适应环境饲养 2 周。选择无致病原、无寄生虫、正常健康 (雌 性无孕) 动物 24 只用于实验 ,年龄 4～5. 5 岁 ,体重 4～6 kg。 1. 2 血样的采集 清醒状态下采集清晨空腹血 ,取血部位为后肢静脉。 1. 3 试剂与仪器 CD3、CD4、CD8 单克隆抗体购自美国 BD 公司 , CD20 单 克隆抗体购自上海国健生物技术研究院。流式细胞仪为 BECKMAN - CULTER 公司产品。 1. 3 样品检测方法 抗凝血分别与抗 CD3、CD4、CD8、CD20 单克隆抗体孵育 半小时后 ,加入红细胞裂解液充分裂解红细胞和血小板 ,流 式细胞仪检测 CD3、CD4、CD8、CD20 细胞阳性率。 1. 4 统计学分析 实验数据以均数 ±标准差表示 ,采用 t 检验比较各组性 别组间差异的显著性。 2 结果 CD3 + 、CD4 + 、CD8 + 、CD20 + 细胞阳性率分别为 51. 49 ± 12. 28、29. 73 ±8. 72、26. 18 ±7. 46、33. 12 ±10. 80。雌雄动物数 据差异无显著性。 3 讨论 猕猴是人类的近属动物 ,在研究人类疾病的病因、发病 机理、预防、诊断、治疗以及疾病模型的复制、药物药理学和 毒理学等方面发挥着重要的作用。全面准确地测定和分析 猕猴生理生化指标具有重要的参考价值。目前国内外学者 对猕猴血液学常规、生化指标报道很多 ,但对免疫学指标进 行测定和分析较少。本实验室应用流式细胞仪等仪器准确 测定 ,并对不同性别动物的指标进行比较的结果表明 ,性别 对 CD3 + 、CD4 + 、CD8 + 、CD20 + 细胞阳性率无显著影响。这为 以猕猴作为试验动物的免疫学试验提供数据支持。 中国比较医学杂志 2005 年 10 月第 15 卷第 5 期 Chin J Comp Med , October 2005 ,Vol. 15. No. 5 287